瑞氏-吉姆薩染色實(shí)驗(yàn)

瑞氏色素是酸性染料伊紅(Eosin)和堿性染料yajialan(Methylene Blue)組成的復(fù)合染料, 對原生質(zhì)的染色有很好的區(qū)別作用。吉姆薩染液由天青2與伊紅混合而成，染色原理和結(jié)果與瑞氏染色法基本相同，姬姆薩染色液對胞漿著色力較強(qiáng)，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，特別是對血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒，著色清晰，但是對胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳，常與故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. ?涂片制備?：

取細(xì)胞懸液進(jìn)行離心，棄去上清液。

加入適量PBS緩沖液，混勻后取適量滴于載玻片前端。

用推片呈30-40°角均勻用力向另一端平穩(wěn)地推出，制備成細(xì)胞涂片。

將涂片放置自然晾干。

2. ?染色?：

對于血涂片，可用組化筆沿著載玻片的邊緣畫一個(gè)大的長方形，以便后續(xù)觀察。其他細(xì)胞涂片則無需此步驟。

滴加適量瑞氏染液，完quan覆蓋細(xì)胞，染色1分鐘。

用純水沖洗組織上的染液，直至玻片流水呈無色。

滴加吉姆薩染色液，染色30秒（可用洗耳球輕輕吹打至染液完quan覆蓋細(xì)胞）。

滴加瑞氏-吉姆薩C溶液（或D溶液），染色一定時(shí)間（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整）。

再次用純水沖洗組織上的染液，直至玻片上流水呈無色。

3. ?觀察與封片?：

稍微甩下載玻片上多余的水份，用顯微鏡快速觀察染色效果。

染色完成后，將涂片置于65℃烤箱烘烤4小時(shí)以上進(jìn)行固定。

使用二甲苯進(jìn)行透明處理，然后用中性樹膠封片。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀

在顯微鏡下觀察，不同類型的細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)出不同的染色特征。例如：

紅細(xì)胞數(shù)量多，體積小，無核，呈粉色或肉粉色。

嗜中性粒細(xì)胞體積略大于紅細(xì)胞，細(xì)胞核呈紫藍(lán)色分葉狀，細(xì)胞質(zhì)幾乎無色。

嗜酸性粒細(xì)胞體積略大于嗜中性粒細(xì)胞，細(xì)胞核呈紫色，通常為2葉，細(xì)胞質(zhì)充嗜酸性顆粒呈紅色。

嗜堿性粒細(xì)胞體積略小于嗜酸性粒細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大小不等被染成紫色的嗜堿顆粒，核1-2葉，胞質(zhì)染成淡藍(lán)色。

淋巴細(xì)胞圓形，體積與紅細(xì)胞相似，核致密染成深紫色。

單核細(xì)胞體積大，細(xì)胞質(zhì)染成灰藍(lán)色，核呈腎型或馬蹄型染成紫藍(lán)色。

注意事項(xiàng)

制作良好的涂片要求厚薄適宜，分布均勻，邊沿整齊。

制作的涂片需要充分干燥以防脫片。

染色時(shí)間可根據(jù)染液濃度、室溫高低、細(xì)胞多少來進(jìn)行調(diào)節(jié)。

瑞氏-吉姆薩染色實(shí)驗(yàn)經(jīng)常用于血液和細(xì)胞涂片、骨髓細(xì)胞涂片、細(xì)菌染色。細(xì)胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核及細(xì)菌呈藍(lán)色，嗜酸性顆粒呈橘紅色。染液中加中性甘油，防止甲醇揮發(fā)或氧化，同時(shí)也可使血細(xì)胞染色較清晰。